fa در القاء تغییرات بدخیمی و افزایش قابلیت مهاجرت ملانوسیت های انسانی A375 اثر محیط رویی سلول های ملانوما پزشکی Medicine پژوهشی Original <p dir="RTL"><strong>سابقه و هدف:</strong> سلول‌های سرطانی، مجموعه‌ای از فاکتورهای مختلف را به محیط پیرامونی خود آزاد می‌کنند که می‌توانند به تغییر عملکرد سلول‌های موجود در ریز‌‌محیط تومور و همچنین سلول‌‌های دورتر از ناحیه‌ی توموری منجر شوند. هدف این مطالعه، بررسی اثر محیط رویی حاصل از رده‌ سلولی ملانوما <span dir="LTR">A375</span> بر ملانوسیت‌های انسانی در شرایط آزمایشگاهی است.</p> <p dir="RTL"><strong>مواد و روش‌ها:</strong> محیط رویی از کشت 48 ساعته رده سلولی ملانوما <span dir="LTR">A375</span> تهیه شد. ملانوسیت‌ها در گروه تست، در فلاسک <span dir="LTR">T-25</span> کشت و به مدت 22 روز با محیط رویی حاصل از ملانوما <span dir="LTR">A375</span> تیمار شدند. در گروه کنترل، همین تعداد سلول در حضور محیط کشت کامل (<span dir="LTR">DMEM</span> حاوی 10% <span dir="LTR">FBS</span>) کشت داده شدند. خصوصیات ریخت‌شناسی سلول‌ها با استفاده از میکروسکوپ نوری معکوس بررسی و نرخ رشد سلول‌ها به کمک روش شمارش مستقیم سلول‌ها محاسبه شد. سپس میزان بیان ژن‌های تشخیصی ملانوما (<span dir="LTR">S100A4</span>، <span dir="LTR">S100A14</span>، <span dir="LTR">MITF</span> و <span dir="LTR">TYR</span>) و ژن‌های مرتبط با فرآیند گذار از حالت اپیتلیالی به حالت مزانشیمی (<span dir="LTR">EMT</span>) شامل <span dir="LTR">CDH1</span>، <span dir="LTR">CDH2</span>، <span dir="LTR">SNAI1</span>، <span dir="LTR">SNAI2</span>، <span dir="LTR">TWIST1</span> و <span dir="LTR">TGF-&beta;1</span> به‌وسیله‌ی <span dir="LTR">Real-Time PCR</span> و میزان مهاجرت سلول‌ها به کمک آزمون خراش، در هر دو گروه مورد بررسی قرار گرفت. از ملانوما <span dir="LTR">A375</span>، به‌عنوان کنترل مثبت استفاده شد.</p> <p dir="RTL"><strong>یافته‌ها:</strong> نتایج نشان داد که تیمار ملانوسیت‌ها با محیط رویی ملانوما <span dir="LTR">A375</span>، سبب تغییر شکل ملانوسیت‌ها، افزایش 62/1 برابری در میزان تکثیر این سلول‌ها (001/0<span dir="LTR">P=</span>)، افزایش معنی‌دار بیان ژن‌های <span dir="LTR">S100A14</span> (003/0<span dir="LTR">P=</span>) و <span dir="LTR">TGF-&beta;1</span> (001/0<span dir="LTR">P=</span>)، کاهش معنی‌دار بیان ژن <span dir="LTR">CDH1</span> (048/0<span dir="LTR">P=</span>) و افزایش معنی‌دار در قابلیت مهاجرت این سلول‌ها شد (05/0<span dir="LTR">P<</span>).</p> <p dir="RTL"><strong>نتیجه‌گیری:</strong> بر اساس نتایج این مطالعه، مولکول‌های آزادشده از رده سلولی ملانوما <span dir="LTR">A375</span> ، می‌توانند برخی از ویژگی‌های مولکولی و عملکردی ملانوسیت‌ها را در جهت القای بدخیمی تغییر دهند.&nbsp;&nbsp;</p> <p><strong>Background and Aim:</strong> Cancer cells release a complex of different factors into their environment that can lead to functional changes in cells within the tumor microenvironment and also farther away from the tumor region. The aim of this study is in vitro evaluation of the effects of conditioned medium derived from A375 human melanoma cell line on the function of human melanocytes.</p> <p><strong>Materials and Methods:</strong> The conditioned medium was prepared from A375 melanoma cell line after 48 hours of culture. Melanocytes in the test group were seeded in T-25 flask and treated with the conditioned medium for 22 days. The same number of melanocytes in the control group was cultured in complete medium (DMEM supplemented with 10% FBS). The morphological characteristics by using inverted light microscope, growth rate by direct cell counting, expression levels of melanoma diagnostic markers (S100A4, S100A14, MITF, TYR) and also epithelial-mesenchymal transition (EMT) related markers (CDH1, CDH2, SNAI1, SNAI2, TWIST1, TGF-&beta;) by real-time PCR and migration rate by scratch assay, were studied in both groups. A375 melanoma cell line was used as a positive control.</p> <p><strong>Results:</strong> The results showed that melanocytes treatment with A375-conditioned medium leads to alteration of the cells morphological characteristics, 1.62 fold increase in melanocytes proliferation rate, significant increase in S100A14 (*p=0.003) and TGF-&beta; (*p=0.001) expression, a significant decrease in CDH1 (*p=0.048) gene expression and also increase in migration rate of the treated melanocytes (*p<0.05).</p> <p><span dir="RTL">&zwj;</span><strong>Conclusion</strong><strong>: </strong>Based on results of this study, secreted molecules derived from A375 melanoma cell line, can change the molecular and functional characteristics of melanocytes in order to induce malignant transformation.</p> ملانوما, ملانوسیت, محیط رویی, مرحله گذار از حالت اپیتلیالی به حالت مزانشیمی Melanoma, Melanocyte, Conditioned medium (CM), Epithelial-mesenchymal transition (EMT) 174 185 http://pajoohande.sbmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-966&slc_lang=fa&sid=1 Davood Sanooghi داود سنوقی 1900319475328460013558 1900319475328460013558 No گروه ژنتیک، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه شهید بهشتی Shirin Farivar شیرین فریور 1900319475328460013559 1900319475328460013559 No دانشکده علوم زیستی، دانشگاه شهید بهشتی Parisa Sahranavard پریسا صحرانورد 1900319475328460013560 1900319475328460013560 No پژوهشکده زیست شناسی و فناوری سلول‌های بنیادی جهاد دانشگاهی، مرکز تحقیقات علوم سلولی، گروه سلول‌های بنیادی و زیست شناسی تکوینی، تهران پژوهشگاه رویان، پژوهشکده زیست شناسی و فناوری سلول‌های بنیادی جهاد دانشگاهی، مرکز تحقیقات علوم سلولی، گروه سلول‌های بنیادی و زیست شناسی تکوینی، تهران Marzieh Ebrahimi مرضیه ابراهیمی marzieh.ebrahimi@gmail.com 1900319475328460013561 1900319475328460013561 Yes پژوهشکده زیست شناسی و فناوری سلول‌های بنیادی جهاد دانشگاهی، مرکز تحقیقات علوم سلولی، گروه سلول‌های بنیادی و زیست شناسی تکوینی، تهران