fa بررسی مهار بیان ژن رپرسور گاماگلوبین با روش RNAi در رده سلولی اریتروئیدی 562 K با هدف ژن درمانی بتاتالاسمی پزشکی Medicine پژوهشی Original سابقه و هدف: بتاتالاسمی از بیماریهای ژنتیکی است که سبب کم‌خونی حاد در افراد مبتلا می‌شود. یکی از روشهای درمان بتاتالاسمی، القای ژن گاماگلوبین جنینی است. کمپلکس پروتئینی DRED از رپرسورهای گاماگلوبین است که از دو زیر واحد متصل شونده به DNA، به نام 2 TRو 4TR تشکیل شده است. یک روش جالب جهت افزایش بیان گاماگلوبین، مهار بیان 4TR توسط مولکول‌های siRNA می‌باشد. هدف از این تحقیق، راه‌اندازی سیستم RNAi به منظور مهار بیان ژن 4TR سلول‌های اریتروئیدی 562K و بررسی میزان بیان گاماگلوبین می‌باشد. مواد و روشها: از لیپید2000 lipofectamineTM جهت ترانسفکشن و از پلاسمید گزارشگر pSV-β-Galactosidase جهت بررسی راندمان استفاده شد. بعد از ترانسفکشن siRNA 4TR، میزان بیان ژن 4TR و گاماگلوبین با روش Real-time PCR در سلول‌های 562K تعیین شد. یافته‌ها: نتایج نشان داد با ترکیب 2000 LipofectamineTM،40% از سلول‌های 562K ترانسفکت شدند. بیان 4TR توسط siRNA 4TR حدود 44% کاهش داشت اگرچه القای ژن گاماگلوبین 18/1 برابر بود. نتیجه‌گیری: گرچه بیان 4TR تا 44% مهار شد ولی القای قابل ملاحظه ژن گاماگلوبین مشاهده نشد. برای عدم القای گاماگلوبین دو مورد قابل بحث است. اول اینکه میزان ترانسفکشن در سلول‌های 562K ، مهار بیان ژن 4TR را محدود می‌سازد. دوم اینکه شاید مهار 4TR و 2TR بطور همزمان در سلول 562K سبب القای گاماگلوبین شود. در مجموع با سیستم RNAi در سلول 562K، مهار ژن 4TR رخ داد ولی مهار بیان این ژن با روش RNAi به تنهایی نمی‌تواند سبب القای ژن گاماگلوبین شده و در ژن درمانی استفاده شود. Background and Aim: Beta-thalassemia is a genetic disorder manifested by the presence of anemia in adult patients. One approach to treatment of beta-thalassemia is induction of the fetal gamma-globin gene. One of the gamma-globin repressors is a complex called DRED (Direct repeat erythroid-definitive). DRED is composed of TR2 and TR4 DNA binding subunits. The aim of this study was to set up the RNAi system to increase the expression of the gamma-globin gene. Materials and Methods: In this study, lipofectaminTM2000 was used to transfect siRNA molecules and pSV-β-Galactosidase vector was used as a reporter to monitor transfection efficiency. Real-time PCR method was used to measure TR4 knockdown and gamma-globin expression levels. Results: Our findings showed that K562 cells were transfected by 40% using LipofectamineTM 2000. Also, the level of TR4 expression decreased by 44% after using TR4siRNA, even though the expression of gamma-globin gene was induced by 1.18 times. ‍Conclusion: Despite a 44% knockdown of TR4, no increase in gamma-globin mRNA was observed. Two factors may count for this observation first, TR4 knockdown may have been limited by our transfection efficiency. Second, simultaneous knockdown of TR2 and TR4 may lead to increased gamma-globin levels. In conclusion, although knocking down of TR4 expression occurred by using RNAi system, this can not be a solitary efficient way to induce the gamma-globin expression. بتاتالاسمی, siRNA 4TR, مهار 4TR, گاماگلوبین, سلول‌های 562 K beta-Thalassemia, TR4 siRNA, TR4 inhibition, gamma-Globins, K562 Cells 234 240 http://pajoohande.sbmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-702&slc_lang=fa&sid=1 Ali Mohammad Asgharian دکتر علی‌محمد اصغریان mehranasgharian@yahoo.com 1900319475328460010996 1900319475328460010996 Yes Instructor, Department of Cell and Molecular Biology, Tonekabone Branch, Islamic Azad University, Tonekabone, Iran مربی، گروه زیست شناسی سلولی مولکولی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد تنکابن Mehdi Banan دکتر مهدی بنان 1900319475328460010997 1900319475328460010997 No دانشگاه آزاد اسلامی واحد تنکابن Hossein Najmabadi دکتر حسین نجم‌آبادی 1900319475328460010998 1900319475328460010998 No دانشگاه آزاد اسلامی واحد تنکابن