fa جداسازی،‌ طبقه‌بندی‌ و شناسایی‌ سوش‌های‌ استرپتومایسز‌ به‌روش‌کموتاکسونومی پزشکی Medicine پژوهشی Original سابقه و هدف: اکتینومایست گروهی از باکتری‌های گرم‌ مثبت رشته‌ای شکل هستند که‌ به لحاظ‌ پاره‌ای‌ از شباهت‌های ظاهری‌ به‌قارچ‌ها، سالیان‌ متمادی‌ در قلمرو اوکاریوت‌ها مورد بررسی‌ و مطالعه‌ قرار می‌گرفتند. این باکتری‌ها در زمینه‌ علوم‌ پزشکی‌ و بیوتکنولوژی‌ اهمیت‌ زیادی دارند، چنان که بعضی‌ از جنس‌های‌ آن‌ قادرند بیماری‌های‌ عفونی‌حاد و مزمنی در انسان و حیوانات‌ ایجاد نمایند. به علاوه بعضی از انواع‌ (استرپتومایست) توانایی‌ تولید آنتی‌بیوتیک‌های مختلف‌ را دارند که نوع و میزان آن در بین گونه‌ها بسیار متفاوت است. مواد و روش ها: پنجاه نمونه ‌خاک‌ از مناطق‌ مختلف‌کشور جمع‌آوری‌ و با استفاده از روش رقت پلیت 140 کلنی ‌خالص با ویژگی‌های استرپتومایسز به دست آمد. 88 سوش از بین آن‌ها انتخاب و به‌روش کروماتوگرافی‌ لایه‌نازک (TLC)، محتوای دیواره سلولی آن‌ها دقیقاً شناسائی گردید. ابتدا اسید‌های آمینه دیواره سلولی باکتری‌ها هیدرولیز و توسط اتر دوپترول شستشو تا چربی‌ها در فاز اتری کاملاً حل و جدا شوند. از عصاره‌های‌ صاف‌ شده‌ با استفاده‌ از لوله‌های‌ موئین‌ لکه‌هایی‌ با فواصل‌ 2 سانتی‌متر از هم‌ بر روی‌ صفحات20*20 سانتی‌متری‌ کروماتوگرافی‌ گذاشته‌ شد. در ابتدا و انتهای‌ صفحه‌ کروماتوگرافی‌ دو لکه‌ استاندارد قرار گرفت‌. در نهایت‌ هرصفحه‌ دارای‌ 8 نمونه‌ و دو لکه‌ استاندارد گردید. یافته ها: پس از ظاهر شدن لکه‌ها، ایزومرهای دی‌آمینو پایمیلیک‌ اسید ( DAP) به‌ رنگ‌ سبز زیتونی متمایل به زرد‌ با Rf های‌ متغیر و سایر اسیدهای‌ آمینه‌ به‌ رنگ‌ ارغوانی ‌نمایان‌ گردید که‌ از طریق‌ مقایسه‌ با استاندارد مورد تفسیر قرارگرفتند. به علت‌ حضور ایزومر چپ‌گرد دی‌آمینو پایمیلیک‌ اسید در صفحات‌، مشخص شد که‌ 97% نمونه‌های‌ مورد آزمایش ‌استرپتومایسز‌ بودند. نتیجه گیری: کموتاکسونومی‌ روشی‌ مناسب‌ برای‌ شناسایی گونه‌های ‌استرپتومایسز می‌با‌شد. Background: The Actinomycetes are gram-positive organisms that tend to grow slowly as branching filaments. They were thought to be related to both bacteria and fungi, but in recent years it has been undoubtedly shown that they are prokaryotic organisms. Actinomycetes have proved to be causal agents of many human and animal infections. They also play as an important rule in producing new antibiotic agents. Materials and Methods: Fifty soil samples collected from different regions of the country were analyzed to determine the presence and types of antibiotic-producing Streptomycetes using dilution plating method. Starch casein agar and glucose yeast extract agar were used as the culture media. 88 selected organisms from 140 isolates were subjected to chemotaxonomy determination. The isomeric form of diaminopimelic acid (DAP) was determined by thin-layer chromatography (TLC) of hydrolyzed whole-organism preparations. A sample of the hydrolysated extract was applied as a 2cm band from the base of the TLC plates. A standard containing meso and LL-DAP was also run at both sides of the sheet for comparison with test mixtures. The plates were developed for about 3½ hours in a glass tank containing 40 ml methanol, 2 ml 6Mol HCl, 5ml Pyridine, and 13 ml water. Results: DAP appears as green/brown spots, changing to yellowish with time. The LL-DAP, meso-DAP and hydroxy-DAP isomers have approximate Rf values. Approximately 97% of test strains contained LL-DAP and the remaining 3%, contained meso-DAP. Conclusion: This study demonstrated a wide variety of Streptomycetes bacteria isolates which are capable to produce antibiotics and TLC is an appropriate method in determination of Them. استرپتومایسز , کموتاکسونومی , کروماتوگرافی لایه‌نازک , دی‌آمینو پایمیلیک ‌اسید Streptomyces, Chemotaxonomy,Thin-layer chromatography, 211 220 http://pajoohande.sbmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-2-42&slc_lang=fa&sid=1 کتر سـید سـعید اشـراقی eshraghs@sina.tums.ac.ir 1900319475328460012103 1900319475328460012103 Yes دانشگاه علوم پزشکی تهران افروزه نجم الهدی 1900319475328460012104 1900319475328460012104 No دانشگاه علوم پزشکی تهران فاطمه حاجی قاسمی 1900319475328460012105 1900319475328460012105 No دانشگاه علوم پزشکی تهران